• Hi-CuT 建库试剂盒-同天生物

Hi-CuT 建库试剂盒

No.YT-4104
【产品简介】
Hi-CuT(Hi-C Coupled chromatin cleavage and Tagmentation)建库试剂盒是将 Hi-C 3.0策略和CUT&Tag联合用于获得蛋白介导的DNA空间互作信息的创新技术。该试剂盒首先参考 Hi-C 3.0 策略,对样本进行双交联、双酶切、补平和连接,之后则按照 CUT&Tag 步骤进行后续实验,包括 ConA beads 结合细胞、孵育一抗、二抗、pA/G-Tn5 融合蛋白、转座、解交联、回收 DNA并扩增,构建完成Hi-CuT文库,操作简单,效果稳定,适用于动物,活细胞等多种类样本的Hi-CuT 建库过程。
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产品详情

【产品组分】

试剂盒

组分名称

YT-4104-04

YT-4104-12

试剂盒1

Hi-C lysis Buffer

2mL

6mL

Exchange Buffer

400μL

1200μL

Wash buffer

1.8mL×2

10.8mL

Bind buffer

400μL

1200μL

ConA beads

40μL

120μL

DNA selection beads

480μL

1140μL

Block buffer

440μL

1320μL

10×Permeabilization bufferⅠ

10μL

30μL

Permeabilization buffer Ⅱ

300μL

900μL

Decrosslink buffer

554μL

1662μL

试剂盒2

Protease Inhibitor Cocktail (EDTA-free)

100μL

300μL

Crosslink agent

4μL

12μL

10×Solution buffer

100μL

300μL

Endonuclease Mix

40μL

120μL

dNTP Mix

12μL

36μL

DNA polymerase Ⅰ

20μL

60μL

5% Digitonin

15μL

45μL

5×Blocker

40μL

120μL

3M NaCl

80μL

240μL

10×Ligation buffer

240μL

720μL

T4 DNA Ligase

10μL

30μL

pA/G-Transposome Mix

4μL

12μL

50×Activating buffer

4μL

12μL

Terminate Buffer

10μL

30μL

50×Proteinase K

4μL

12μL

2×NGS PCR mix

100μL

300μL

Index

4T

12T

【运输与存储】

试剂盒

运输

存储

保质期

试剂盒1

冰袋运输

2~8℃保存

12个月

试剂盒2

干冰运输

-25~ -15℃保存

【产品优势】

传统的多组学联用方案(如Hi-C + ChIP-seq)需要分别进行两次实验,耗时长、所需细胞量多、数据整合困难。HiCUT一举解决了这些痛点,其优势主要体现在:

  1.  

    原位耦合,信息保真度高:在完整的细胞核内同时完成蛋白结合位点标记和染色质交联,近可能保持细胞内真实的生物学状态,避免分开实验带来的人工误差。

  2.  

    超高灵敏度,所需细胞量极少:基于CUT&Tag的原理,使用ConA磁珠富集细胞核,效率极高。通常只需要 50,000 - 500,000个细胞 即可完成高质量建库,而传统in situ Hi-C通常需要数百万甚至上千万细胞。这使得对稀有细胞样本的研究成为可能。

  3.  

    独特的index体系,超高数据准确性:有效区分真实的生物学互作信号与在PCR扩增、测序过程中产生的重复序列(duplicates),从而大幅降低数据噪音,提高信噪比,使得互作判断更加准确可靠。

  4.  

    高分辨率:由于Tn5转座酶切割的偏好性低,且实验流程高效,HiCUT能够获得比传统Hi-C更清晰的互作图谱,更容易鉴定到特定蛋白介导的精细染色质环(Loops)和拓扑关联结构域(TADs)边界。

  5.  

    高效便捷,流程简化:将传统Hi-C中繁琐的细胞核提取、酶切、末端标记、连接等步骤,全部整合由Tn5转座酶“一步完成”(酶切+接头连接),极大缩短了实验操作时间,减少了样本损失。

【注意事项】

1. 实验过程中请穿戴实验服、口罩及一次性手套,在洁净实验区域内进行实验操作,且使用无RNA酶的试剂与耗材;

2. 试剂盒的各个组分,在使用前需完全解冻并充分混匀,试剂待用期间需放置于冰上。

【自备材料】

1. 靶蛋白的一抗以及对应的二抗(一抗应为 ChIP 级别或经 ChIP/CUT&Tag等实验验证);

2. 磷酸盐缓冲液(PBS)、甲醛溶液、无菌无酶水、无水乙醇;

3. 文库质检:Quibit、Agilent 2100 Bioanalyzer DNA 1000 Chip/ High Sensitivity Chip 或其他等效产品;

4. 其他材料:低吸附枪头、低吸附离心管、PCR 管、磁力架、PCR 仪等。

【与其他相关技术的对比】

【操作流程图示】

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