【产品组分】
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试剂盒 |
组分名称 |
YT-4104-04 |
YT-4104-12 |
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试剂盒1 |
Hi-C lysis Buffer |
2mL |
6mL |
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Exchange Buffer |
400μL |
1200μL |
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Wash buffer |
1.8mL×2 |
10.8mL |
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Bind buffer |
400μL |
1200μL |
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ConA beads |
40μL |
120μL |
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DNA selection beads |
480μL |
1140μL |
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Block buffer |
440μL |
1320μL |
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10×Permeabilization bufferⅠ |
10μL |
30μL |
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Permeabilization buffer Ⅱ |
300μL |
900μL |
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Decrosslink buffer |
554μL |
1662μL |
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试剂盒2 |
Protease Inhibitor Cocktail (EDTA-free) |
100μL |
300μL |
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Crosslink agent |
4μL |
12μL |
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10×Solution buffer |
100μL |
300μL |
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Endonuclease Mix |
40μL |
120μL |
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dNTP Mix |
12μL |
36μL |
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DNA polymerase Ⅰ |
20μL |
60μL |
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5% Digitonin |
15μL |
45μL |
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5×Blocker |
40μL |
120μL |
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3M NaCl |
80μL |
240μL |
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10×Ligation buffer |
240μL |
720μL |
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T4 DNA Ligase |
10μL |
30μL |
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pA/G-Transposome Mix |
4μL |
12μL |
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50×Activating buffer |
4μL |
12μL |
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Terminate Buffer |
10μL |
30μL |
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50×Proteinase K |
4μL |
12μL |
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2×NGS PCR mix |
100μL |
300μL |
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Index |
4T |
12T |
【运输与存储】
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试剂盒 |
运输 |
存储 |
保质期 |
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试剂盒1 |
冰袋运输 |
2~8℃保存 |
12个月 |
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试剂盒2 |
干冰运输 |
-25~ -15℃保存 |
【产品优势】
传统的多组学联用方案(如Hi-C + ChIP-seq)需要分别进行两次实验,耗时长、所需细胞量多、数据整合困难。HiCUT一举解决了这些痛点,其优势主要体现在:
原位耦合,信息保真度高:在完整的细胞核内同时完成蛋白结合位点标记和染色质交联,近可能保持细胞内真实的生物学状态,避免分开实验带来的人工误差。
超高灵敏度,所需细胞量极少:基于CUT&Tag的原理,使用ConA磁珠富集细胞核,效率极高。通常只需要 50,000 - 500,000个细胞 即可完成高质量建库,而传统in situ Hi-C通常需要数百万甚至上千万细胞。这使得对稀有细胞样本的研究成为可能。
独特的index体系,超高数据准确性:有效区分真实的生物学互作信号与在PCR扩增、测序过程中产生的重复序列(duplicates),从而大幅降低数据噪音,提高信噪比,使得互作判断更加准确可靠。
高分辨率:由于Tn5转座酶切割的偏好性低,且实验流程高效,HiCUT能够获得比传统Hi-C更清晰的互作图谱,更容易鉴定到特定蛋白介导的精细染色质环(Loops)和拓扑关联结构域(TADs)边界。
高效便捷,流程简化:将传统Hi-C中繁琐的细胞核提取、酶切、末端标记、连接等步骤,全部整合由Tn5转座酶“一步完成”(酶切+接头连接),极大缩短了实验操作时间,减少了样本损失。
【注意事项】
1. 实验过程中请穿戴实验服、口罩及一次性手套,在洁净实验区域内进行实验操作,且使用无RNA酶的试剂与耗材;
2. 试剂盒的各个组分,在使用前需完全解冻并充分混匀,试剂待用期间需放置于冰上。
【自备材料】
1. 靶蛋白的一抗以及对应的二抗(一抗应为 ChIP 级别或经 ChIP/CUT&Tag等实验验证);
2. 磷酸盐缓冲液(PBS)、甲醛溶液、无菌无酶水、无水乙醇;
3. 文库质检:Quibit、Agilent 2100 Bioanalyzer DNA 1000 Chip/ High Sensitivity Chip 或其他等效产品;
4. 其他材料:低吸附枪头、低吸附离心管、PCR 管、磁力架、PCR 仪等。
【与其他相关技术的对比】

【操作流程图示】

