EU-Click新生RNA捕获和建库试剂盒

No.YT-4102

【产品简介】
本试剂盒专为 Illumina 测序平台开发，用于新生转录本 RNA 文库制备。整套实验操作流程简单便捷，大幅缩短文库构建时长，实验重复性好，数据结果稳定，可适配活体模式动物、各类植株组织、活细胞等多元化生物样本，完成新生 RNA 文库制备工作。
试剂盒采用5-乙炔基尿苷（EU）对活态样本内新合成 RNA 进行特异性标记，借助点击化学偶联反应，为带有 EU 修饰的新生 RNA 连接生物素基团，之后通过链霉亲和素修饰磁珠定向富集捕获新生RNA，富集得到的RNA可直接进行测序文库构建。
搭配梯度时间梯度取样方案，本产品可实现新生RNA丰度精准定量，同步解析RNA转录合成速率与降解代谢动态规律。若需同步获取样本稳态转录组信息，可在点击化学反应操作前，取部分纯化总 RNA 开展常规全转录组测序，实现单份样本同时完成稳态总RNA、新生转录本两套测序分析。

产品详情

【产品组分】

试剂盒	组分名称	YT-4102-12	YT-4102-48
试剂盒1	Click-Buffer-2	120 μL	120 μL×4
	保护剂	600 μL	600 μL×4
	链酶亲和素磁珠	240 μL	240 μL×4
	2×Wash Buffer*	1320 μL	1320 μL×4
	溶液A	960 μL	960 μL×4
	溶液B	960 μL	960 μL×4
试剂盒2	EU (1 M)**	100 μL	100 μL×4
	生物素	36 μL	36 μL×4
	硫酸铜	36 μL	36 μL×4
	Click-Buffer-1	72 μL	72 μL×4
	Frag/Prime Buffer	216 μL	216 μL×4
	1st Strand Enzyme Mixture	24 μL	24 μL×4
	1st Strand Synthesis Buffer	72 μL	72 μL×4
	2nd Strand Enzyme Mixture	60 μL	60 μL×4
	2nd Strand Buffer	360 μL	360 μL×4
	Ligation Buffer	360 μL	360 μL×4
	DNA Ligase	60 μL	60 μL×4
	通用接头	20 μL	20 μL×4
	2×文库扩增mix	300 μL	300 μL×4
试剂盒3	接头	12 index	12 index×4

*Wash Buffer稀释：可用DEPC水。

**此处提供的EU用量以T25培养瓶培养细胞的需求量为准，若需要更多的EU试剂，可单独购买。

【运输与存储】

试剂盒	运输	存储	保质期
试剂盒1	冰袋运输	2~8℃保存	18个月
试剂盒2	≤ 0℃运输	-25~ -15℃保存
试剂盒3	≤ 0℃运输	-25~ -15℃保存

【产品优势】

•动态监测RNA合成、降解全过程，挖掘静态测序找不到的基因调控新机制；

•精准建模刺激条件下转录、降解双重调控的RNA动态变化，量化双向调控贡献；

•分离新生RNA信号，降低背景干扰，低丰度应答基因也能精准识别，提升差异分析精度；

•摒弃复杂Pull-down富集步骤，操作简单省时，减少人工操作误差；

•温和标记无细胞毒性，不干扰细胞原有生理转录状态，数据更贴近体内真实情况；

•适配活细胞、活体动物、植物等多类活体样本；

•标记效率稳定，适合大批量时间梯度动力学样本检测。

【注意事项】

1. 实验过程中请穿戴实验服、口罩及一次性手套，在洁净实验区域内进行实验操作，且使用无RNA酶的试剂与耗材；

2. 试剂盒的各个组分，在使用前需完全解冻并充分混匀，试剂待用期间需放置于冰上。

【自备材料】

1. RNA提取：Trizol或RNA提取试剂盒等相关试剂；

2. rRNA去除试剂盒；

3. DNA纯化磁珠；

4. RNA质控：Nanodrop、Qubit荧光计、Agilent 2100 Bioanalyzer或其他等效产品；

5. 文库质检：Qubit、Agilent 2100 Bioanalyzer或其他等效产品；

6. 其他：磷酸盐缓冲液、无水乙醇、无菌超纯水、无菌无酶水，低吸附枪头、PCR管、磁力架、PCR仪等。

【实验流程】

EU-Click新生RNA捕获与检测试剂盒原理图.jpg

EU-Click新生RNA捕获试剂盒实验流程示意图