EU-Click新生RNA捕获和建库试剂盒
EU-Click Nascent RNA Capture & Library Prep kit
EU-Click新生RNA捕获和建库试剂盒
【产品简介】
本试剂盒专为 Illumina 测序平台开发，用于新生转录本 RNA 文库制备。整套实验操作流程简单便捷，大幅缩短文库构建时长，实验重复性好，数据结果稳定，可适配活体模式动物、各类植株组织、活细胞等多元化生物样本，完成新生 RNA 文库制备工作。
试剂盒采用5-乙炔基尿苷（EU）对活态样本内新合成 RNA 进行特异性标记，借助点击化学偶联反应，为带有 EU 修饰的新生 RNA 连接生物素基团，之后通过链霉亲和素修饰磁珠定向富集捕获新生RNA，富集得到的RNA可直接进行测序文库构建。
搭配梯度时间梯度取样方案，本产品可实现新生RNA丰度精准定量，同步解析RNA转录合成速率与降解代谢动态规律。若需同步获取样本稳态转录组信息，可在点击化学反应操作前，取部分纯化总 RNA 开展常规全转录组测序，实现单份样本同时完成稳态总RNA、新生转录本两套测序分析。
【产品组分】
试剂盒 | 组分名称 | YT-4102-12 | YT-4102-48 |
试剂盒1 | Click-Buffer-2 | 120 μL | 120 μL×4 |
保护剂 | 600 μL | 600 μL×4 | |
链酶亲和素磁珠 | 240 μL | 240 μL×4 | |
2×Wash Buffer* | 1320 μL | 1320 μL×4 | |
溶液A | 960 μL | 960 μL×4 | |
溶液B | 960 μL | 960 μL×4 | |
试剂盒2 | EU (1 M)** | 100 μL | 100 μL×4 |
生物素 | 36 μL | 36 μL×4 | |
硫酸铜 | 36 μL | 36 μL×4 | |
Click-Buffer-1 | 72 μL | 72 μL×4 | |
Frag/Prime Buffer | 216 μL | 216 μL×4 | |
1st Strand Enzyme Mixture | 24 μL | 24 μL×4 | |
1st Strand Synthesis Buffer | 72 μL | 72 μL×4 | |
2nd Strand Enzyme Mixture | 60 μL | 60 μL×4 | |
2nd Strand Buffer | 360 μL | 360 μL×4 | |
Ligation Buffer | 360 μL | 360 μL×4 | |
DNA Ligase | 60 μL | 60 μL×4 | |
通用接头 | 20 μL | 20 μL×4 | |
2×文库扩增mix | 300 μL | 300 μL×4 | |
试剂盒3 | 接头 | 12 index | 12 index×4 |
*Wash Buffer稀释：可用DEPC水。
**此处提供的EU用量以T25培养瓶培养细胞的需求量为准，若需要更多的EU试剂，可单独购买。
【运输与存储】
试剂盒 | 运输 | 存储 | 保质期 |
试剂盒1 | 冰袋运输 | 2~8℃保存 | 18个月 |
试剂盒2 | ≤ 0℃运输 | -25~ -15℃保存 | |
试剂盒3 | ≤ 0℃运输 | -25~ -15℃保存 |
【产品优势】
l 动态监测RNA合成、降解全过程，挖掘静态测序找不到的基因调控新机制；
l 精准建模刺激条件下转录、降解双重调控的RNA动态变化，量化双向调控贡献；
l 分离新生RNA信号，降低背景干扰，低丰度应答基因也能精准识别，提升差异分析精度；
l 摒弃复杂Pull-down富集步骤，操作简单省时，减少人工操作误差；
l 温和标记无细胞毒性，不干扰细胞原有生理转录状态，数据更贴近体内真实情况；
l 适配活细胞、活体动物、植物等多类活体样本；
l 标记效率稳定，适合大批量时间梯度动力学样本检测。
【注意事项】
1. 实验过程中请穿戴实验服、口罩及一次性手套，在洁净实验区域内进行实验操作，且使用无RNA酶的试剂与耗材；
2. 试剂盒的各个组分，在使用前需完全解冻并充分混匀，试剂待用期间需放置于冰上。
【自备材料】
1. RNA提取：Trizol或RNA提取试剂盒等相关试剂；
2. rRNA去除试剂盒；
3. DNA纯化磁珠；
4. RNA质控：Nanodrop、Qubit荧光计、Agilent 2100 Bioanalyzer或其他等效产品；
5. 文库质检：Qubit、Agilent 2100 Bioanalyzer或其他等效产品；
6. 其他：磷酸盐缓冲液、无水乙醇、无菌超纯水、无菌无酶水，低吸附枪头、PCR管、磁力架、PCR仪等。
【实验流程】
EU-Click新生RNA捕获试剂盒实验流程示意图
